如何在臺(tái)式掃描電鏡中進(jìn)行生物樣品的冷凍切片觀察
日期：2024-08-07
在臺(tái)式掃描電鏡（SEM）中進(jìn)行生物樣品的冷凍切片觀察是一種常見的方法，可以保留生物樣品的原始結(jié)構(gòu)和形態(tài)。以下是實(shí)現(xiàn)這一過程的步驟和技術(shù)：
1. 樣品準(zhǔn)備
1.1 樣品固定
化學(xué)固定：使用固定劑（如戊二醛和滲透劑）對(duì)生物樣品進(jìn)行固定，以保持其結(jié)構(gòu)完整。
冷凍固定：快速冷凍樣品，通常使用液氮進(jìn)行冷凍，以防止冰晶形成并損傷樣品結(jié)構(gòu)。
1.2 樣品冷凍和包埋
冷凍介質(zhì)：將樣品浸入冷凍介質(zhì)（如蔗糖、乙二醇或乙二醇-甘油混合物）中進(jìn)行冷凍保護(hù)。
包埋介質(zhì)：將樣品包埋在冷凍包埋介質(zhì)中，如OCT（Optimal Cutting Temperature）化合物。
2. 樣品切片
2.1 冷凍切片機(jī)（Cryo-Ultramicrotome）
樣品安裝：將包埋后的樣品安裝在冷凍切片機(jī)的樣品臺(tái)上。
切片操作：使用冷凍切片機(jī)在低溫環(huán)境下對(duì)樣品進(jìn)行超薄切片，通常切片厚度在50-100納米之間。
3. 樣品轉(zhuǎn)移和處理
3.1 轉(zhuǎn)移到載玻片
冷凍轉(zhuǎn)移：將切片轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的載玻片上，確保樣品保持在低溫狀態(tài)下，以防止樣品變性。
3.2 樣品干燥
冷凍干燥：在低溫和真空環(huán)境下進(jìn)行冷凍干燥，去除樣品中的冰，以防止在觀察過程中樣品變形。
4. 樣品涂覆
4.1 導(dǎo)電涂層
金屬涂層：使用金屬噴鍍或?yàn)R射設(shè)備，在樣品表面涂覆一層導(dǎo)電金屬（如金、鉑或鉻），以減少電子束對(duì)樣品的充電效應(yīng)。
5. 樣品觀察
5.1 裝載樣品
安裝樣品：將處理后的樣品安裝在SEM的樣品臺(tái)上，確保樣品穩(wěn)定。
5.2 SEM設(shè)置
低溫樣品臺(tái)：使用低溫樣品臺(tái)，保持樣品在低溫環(huán)境下進(jìn)行觀察，通常在液氮溫度（-196°C）下操作。
低加速電壓：選擇適當(dāng)?shù)募铀匐妷海ǔ］^低的電壓（如1-5 kV）可以減少樣品損傷和充電效應(yīng)。
5.3 圖像采集
掃描參數(shù)調(diào)整：根據(jù)樣品特性和成像需求，調(diào)整SEM的掃描參數(shù)（如電子束強(qiáng)度、掃描速度、工作距離等），以獲得清晰的圖像。
圖像采集和處理：使用SEM軟件進(jìn)行圖像采集和處理，獲得高分辨率的樣品表面結(jié)構(gòu)圖像。
6. 數(shù)據(jù)分析和保存
圖像分析：對(duì)采集到的圖像進(jìn)行分析，提取所需信息。
結(jié)果保存：將圖像和數(shù)據(jù)保存為適當(dāng)?shù)奈募袷剑糜谶M(jìn)一步研究和報(bào)告。
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作者：澤攸科技